一种植物提取物总黄酮含量的测定
一、仪器
紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个
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药品
芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g
实验步骤
（一）、标准曲线绘制
1. 芦丁标准品40mg置于称量瓶中80℃烘干至恒重，取烘干后的20mg芦丁标准品用水定容至100mL,得200μg/mL芦丁标准贮备液，精确量取上述浓度芦丁标准贮备溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL分别置于10 mL具塞试管中。
2. 向具塞试管中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0 mL。
3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。
4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。
5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。
6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。研究表明芦丁标准品含量在0～0.5mg 范围内与吸光度具有良好的线性关系。
（二）、样品处理及总黄酮的提取 （以60%乙醇提取为例）
1. 将样品在80℃烘干24 h，粉碎后过80目筛置于干燥器中备用。
2. 称取500±2 mg样品于25 mL具塞三角瓶中，使样品位于三角瓶底部（重复3次）。
3. 每瓶加4 mL 60％乙醇，放超声波提取器提取2 h。提取液转至10 mL具塞离心管中。
4. 再向具塞三角瓶中加4 mL的60％乙醇，放超声波提取器提取1 h，提取液转至相应10 mL具塞离心管中，6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL具塞试管中。60％乙醇定容至10 mL，待测。
（三）、样品提取液总黄酮含量的测定
准确吸取总黄酮提取液（稀释适当倍数）2.0 mL于10 mL具塞试管中，加入60％乙醇3.0 mL,然后按步骤一中（3,4,5,6）的方法测定吸光度，试剂空白为参比（提取溶剂代替提取液），将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量。
长沙上禾生物
